STEP1: 种子细胞扩增

·以0.3×10^6 cells/mL接种细胞，3天传代或扩增一次，37℃，120 rpm (50 mm振幅)，5% CO2培养。

·转染前一天将细胞密度调整到2×10^6 cells/mL，确保转染当天活细胞密度到6×10^6 cells/mL左右

STEP2: 转染

以125 mL摇瓶，20 mL培养体积转染为例，其他体积等比例换算即可

·种子细胞200 g离心5 min，丢弃旧培养基，用新鲜基础培养基重悬细胞至12×10^6 cells/mL左右

·将80 µg (即4 µg/mL) 质粒滴加到培养液中，轻轻摇匀

·将60µL (即3 µL/mL) NovoCHO™Booster滴加到培养液中，轻轻摇匀

·缓慢滴加150 µL NovoCHO™Trans (即7.5 µL/mL) 至培养液中，边滴加边摇动混匀

·放入摇床，37℃，120 rpm (50 mm振幅)，5% CO2培养，培养时间记为Day0 ​​​​​​​

STEP3：补料培养

·转染后一天 (Day1) 补加60µL (0.3%) 的NovoCHO™Enhancer (仅此一次)，1.8 mL (9%) 的NovoCHO™Feed和6 g/L葡萄糖，并降温至32℃培养

·Day7收样补料策略：Day5补加1.8 mL（9%）的NovoCHOTMFeed，Day7收样

·Day14收样补料策略：Day5和Day9补加1.8 mL（9%）的NovoCHOTMFeed，Day7和Day11分别补加糖8 g/L，细胞活率小于60%或到既定培养时间结束培养