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ꄴ前一个： KT6032-Novo-Light荧光素酶报告基因检测试剂盒 | KT6032

1.细胞株信息

货号	CL4005
基因	Human LAG3
名称	Jurkat-LAG3-Luc
宿主细胞	Jurkat
数量	2支（2*106 cells/支）
形式	冻存细胞株
稳定性	暂未考察
应用	LAG3抗体活性检测
冻存液	50% RPMI 1640+40%FBS+10%DMSO
生长培养基	Culture medium: 90% RPMI 1640+10% FBS+200 μg/mL Hygromycin B +0.5 μg/mL Puromycin
实验培养基	Assay medium : 90% RPMI 1640+10% FBS

2.背景介绍

Jurkat-LAG3-Luc的细胞表面高表达LAG3，下游具有报告基因RE-luciferase。该细胞可用于评估 LAG-3 阻断剂的活性。当与表达人类 MHCⅡ的目标细胞共培养时，LAG-3/MHCⅡ相互作用会抑制 TCR 信号传导和 RE-luciferase信号的表达。而通过 LAG-3 抗体阻断 LAG-3/MHCⅡ相互作用可解除抑制信号，从而激活 TCR 并诱导 RE-luciferase信号的表达，该信号值高低和LAG-3 抗体活性或浓度成正比，形成剂量依赖型曲线。

构建的报告基因法优势如下：

方法稳定、变动小；
实验窗口大、响应值高；
利用转基因构建的细胞可稳定传代；
该细胞株可以作为LAG-3 抗体药物活性检测细胞株；
适合放行、长期稳定性检测，方便方法验证；

图1：报告基因法检测LAG-3 抗体作用机制图

3.实验数据展示

3.1物料信息

靶细胞：Jurkat-LAG3-Luc（NovoBio，Cat#CL4005）

药物：Favezelimab

实验培养基：Assay medium : 90% RPMI 1640+10%FBS

3.2数据展示

3.2.1qPCR检测靶标数据

用qPCR检测手段检测Jurkat-LAG3-Luc表面的LAG3的表达情况，用空白细胞Jurkat作为阴参对照。其结果表面： qPCR引物不能在空白细胞Jurkat细胞中检测到有效扩增，但是可以在Jurkat-LAG3-Luc细胞中得到有效扩增。

表1：qPCR检测靶标数据表

细胞名称

靶标检测qPCR引物

靶标CT值

内参(actin)CT值

Jurkat

qPCR-LAG3-F(5’→3’)：GACCCGGTCTTTCCTCACTG

qPCR-LAG3 -R(5’→3’)：GGATCCAGGTGACCCAAAGG

31.2

12.5

Jurkat-LAG3-Luc

19.8

12.6

3.2.2.专属性研究

使用药物anti-TIGIT和Human IgG Control蛋白作为阴参对比，检验Jurkat-LAG3-Luc细胞株的活性专属性。细胞株对Favezelimab（anti-LAG3）有明显的浓度依赖响应信号，对anti-TIGIT和Human IgG Control没有响应。细胞株具有较好专属性。